«Многие люди избегают этой технологии для быстрого анализа, потому что у нее есть вероятность ложных срабатываний, но я думаю, что мы доказали, что с помощью этого теста можно получить высокую чувствительность и высокую точность», — говорит старший автор Дэвид ДиДжиусто, исполнительный директор. Директор отделения стволовых клеток и клеточной терапии Медицинской школы Стэнфордского университета. «Этот метод довольно прост, и любая лаборатория, использующая лентивирусные векторы, должна рассмотреть возможность использования его на своих трансдуцированных лентивирусами клеточных продуктах, чтобы задокументировать отсутствие поддающихся обнаружению репликационно-компетентных вирусов."
Лентивирусы — это тип ретровирусов, обычно используемый компаниями для введения новых генов в терапевтические CAR-T-клетки (Т-клетки химерного антигенного рецептора), которые снова вводятся пациентам для борьбы с раком. Эти вирусы обычно разрабатываются так, чтобы быть безопасными, но, если они все еще активно реплицируются у пациента, они могут вызвать рак.
Ранние итерации ретровирусных векторов первого поколения были связаны с лейкемией, но этот риск был сведен к нулю с лентивирусами третьего поколения. В качестве меры предосторожности агентства, такие как FDA, действительно требуют тестирования всех клеток, измененных лентивирусными векторами, чтобы гарантировать отсутствие репликационно-компетентного вируса.
Экспресс-тест, разработанный ДиДжиусто и его коллегами, ищет маркер вирусной оболочки в образце сконструированных клеток, которого там не должно быть, если нет репликации вируса. Одним из преимуществ является то, что это можно сделать в лаборатории, когда культуры свежеприготовлены с некоторыми молекулярными реагентами и человеком, работающим в течение пары часов.
Стандартная процедура, требуемая FDA, требует 3-4 недели, чтобы проверить, растут ли вирусные культуры, и образцы необходимо заморозить и отправить во внешний центр тестирования.
«Я думаю, что при наличии передовой научной практики и хорошего технического персонала это можно было бы организовать в лабораториях людей в целом», — говорит ДиДжиусто. "Мы публикуем нашу работу, чтобы люди на ранних стадиях испытаний могли получить доступ к высококвалифицированному тесту."
Задача проведения экспресс-теста заключалась в том, чтобы убедиться, что анализ имеет специфичность и чувствительность к вирусным маркерам.
Ложноположительные результаты все еще возможны, но только для 1 из 100 образцов, и их можно затем подтвердить, пропустив образец через стандартную процедуру. Группа ДиДжиусто стала партнером компании Stanford Medicine Crystal Mackall, эксперта по иммунотерапии рака, и использует экспресс-тест в фазе 1 клинических исследований.
Процедура также может быть полезна в других областях, где необходима вирусная модификация, и эти варианты использования также изучаются.